xGen cfDNA & FFPE DNA Library Prep v2 MC Kitのワークフロー 最初の手順では、末端修復酵素がcfDNAまたは切断されたインプットDNAを平滑末端DNAに変換し、ライゲーションの準備をします。次に、ライゲーション1酵素が、ライゲーション1アダプターの一本鎖を挿入断片の3’末端に追加する触媒をします。この新しい酵素は挿入断片をともにライゲーションできず、キメラ形成を最小限に抑えます。ライゲーション1アダプターの3’末端にも、アダプターダイマー形成を防ぐブロッキンググループが含まれています。ライゲーション2アダプターは、ライゲーション1アダプターに相補的に塩基をギャップ充填するプライマーとして機能し、DNA挿入断片の’5末端までライゲーションして、二本鎖産物を生成します。最後の手順では、Illumina®プラットフォームにおける配列決定用のサンプルインデックスシーケンスが、IDT 2x HiFi PCR mixを用いたPCRで組み込まれます。